色譜柱使用
1.取出色譜柱，仔細查看柱身洗脫液流向箭頭標識，用手旋下柱兩端的塑料堵頭，放好色譜柱，使洗脫液流向和柱身所示流向一致，如圖所示：

2.用手將“連接管路的不銹鋼或者其它材質的接頭”旋入色譜柱兩端，管路接頭要和色譜柱接口連接緊密，確保零死體積連接，在色譜儀正常運行時沒有漏液。

色譜柱保存
1.短期保存：間隔不超過四天，色譜柱按平時維護程序沖洗至基線平穩(wěn)，反相色譜柱保存在不帶有緩沖鹽、離子對試劑的有機相/水溶液中，有機相不低于20%；正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中，反相使用保存在純有機溶劑中；并將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。

2.長期保存：反相色譜柱保存在80%甲醇或80%乙腈水溶液中；正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中，反相使用時需將柱內(nèi)存儲液用異丙醇置換，zui后用正己烷保存。將色譜柱從儀器上取下，并將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。

使用注意事項
液相色譜柱是液相色譜儀的心臟，有嚴格的生產(chǎn)標準和測試程序，為了充分發(fā)揮其性能，zui大程度延長其壽命，請仔細閱讀此部分。
1.色譜柱使用前請先確認色譜柱內(nèi)的存儲液
月旭公司色譜柱的存儲液，如沒有特殊說明均為質檢報告中所述流動相，氨基（NH2）、硅膠柱（SiO2）均為正相條件-正己烷/異丙醇體系，反相柱(C8、C18、Phenyl-Hexyl)均為甲醇/水體系，檢測前，請用相互溶的試劑將其替換。
2.新的色譜柱平衡
月旭公司建議新的反相色譜柱用色譜級的純甲醇以低流速沖洗色譜柱30個柱體積，再更換成能與檢測流動相互溶的流動相沖洗30個柱體積，zui后用流動相穩(wěn)定系統(tǒng)至基線平穩(wěn)；新的正相色譜柱用色譜級的異丙醇以低流速沖洗30個柱體積，再更換成檢測流動相穩(wěn)定系統(tǒng)至基線平穩(wěn)。
3.色譜柱的使用方向確認
月旭公司生產(chǎn)的液相色譜柱標簽上的箭頭方向為流動相流向，使用過程按此方向可以避免雙向混用，導致兩端填料同時污染，不利于色譜柱的再生和維護。
4.流動相和樣品保持潔凈
由于懸浮在樣品或流動相中的細小顆粒會堵塞色譜柱兩端的篩板，月旭公司建議各種試劑選用色譜純級；如有少量的分析純試劑，使用前建議用0.45μm孔徑以下的濾膜過濾。

樣品中的雜質是造成色譜柱污染、柱效下降的zui主要原因之一，復雜樣品可選樣品預處理柱（SPE柱）進行樣品處理。如果不方便處理，使用相匹配的保護柱，樣品溶劑與流動相要相匹配。不能出現(xiàn)樣品不互溶，極性相差太大等想象，否則會造成色譜峰形變差，鬼峰等現(xiàn)象，使用流動相溶解樣品能有效的避免上述情況發(fā)生。

5.色譜柱允許的pH范圍
每款色譜柱都有自己特定允許使用的pH范圍，在pH范圍以外使用，會使硅膠基質溶解或鍵合相水解，對色譜柱造成不可恢復的損傷。如果在臨界pH處使用，分析結束后立即用適合于色譜柱保存并與當前使用的流動相互溶的淋洗液置換掉。

TopsilTM 系列色譜柱pH耐受范圍：

色譜柱維護
1.柱壓升高
這是每個色譜工作者都很頭疼的問題，長時間使用造成柱壓的緩慢升高通常是正常現(xiàn)象；短時間甚至是突然的柱壓升高通常是異常升高，排除儀器的故障，確定是色譜柱自身原因，一般有以下幾點：
1) 柱頭的過濾篩板污染(固體顆粒物堵塞、強保留物質累積)，解決方法
為：
a.在柱前端加上在線過濾器或保護柱，用甲醇/水=20/80 1.0ml/min反向沖洗色譜柱180min；
b.在柱前端加上在線過濾器或保護柱，反向使用；
c.可將柱頭打開，將色譜柱頭中過濾篩板取出，在稀硝酸溶液內(nèi)超聲清洗20min，純水超聲清洗20min，zui后用甲醇超聲清洗20min，重新裝入色譜柱。
2) 柱頭填料污染(固體顆粒物堵塞、強保留物質累積)，解決方法為：
a.用可以溶解污染物的溶劑較長時間(180min)反向沖洗色譜柱；
b.可將柱頭打開，小心取出被污染的填料，用相同的填料重新裝入修復。
3) pH使用不當造成的損傷：
pH使用不當造成固定相的缺失或塌陷，很難使色譜柱恢復，只能更換色譜柱。

2.使用保護柱和在線過濾器
樣品和流動相中不能*過濾掉及泵磨損、密封圈和管路老化產(chǎn)生的固體顆粒物，進入到色譜柱中就會堵塞篩板，導致柱壓升高，柱效下降，保護柱和在線過濾器上都有篩板，孔徑與分析柱的孔徑相同，能阻止顆粒物到達色譜柱，在分析故障中，柱壓升高占很大比例，因此建議您在色譜柱前端加上在線過濾器或者保護柱。
3.緩沖鹽的正確使用
緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機溶劑，使用不當會析出，加快泵柱塞桿和密封圈，流通閥的磨損，堵塞色譜柱頭篩板，填料基質上的微孔和顆粒間的間隙，使填料板結柱壓升高，阻礙基質上鍵合相的碳鏈自由舒展，使色譜柱保留能力下降，柱效降低，縮短其使用壽命，緩沖鹽析出后很難去除，因此正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱的使用壽命非常重要，具體方法如下：“使用前過渡! 使用后沖洗!”

1) 等度條件：分析前后用過渡流動相沖洗柱體積不少于20-30個柱體積，或分析完成后用過渡流動相以0.2ml/min（根據(jù)柱規(guī)格調(diào)整）沖洗過夜；
2) 梯度條件：分析前，用與初始流動相組成相同的流動相以分析流速沖洗色譜柱不少于20-30個柱體積，分析后，用該過渡流動相沖洗色譜柱不少于20-30個柱體積，且梯度盡量平緩，避免緩沖鹽析出；
過渡流動相：有機相和水相的比例和分析流動相中兩相比例一致，或者水相比例高于分析流動相，不含緩沖鹽。
3) 緩沖鹽析出：
方案1：用甲醇/水＝10/90以分析速度流速35℃條件下反向沖洗色譜柱120min；
方案2：用甲醇/水＝10/90以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。

4.避免強保留物質在色譜柱保留
強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積，是一個緩慢的過程，一段時間后會對樣品成分產(chǎn)生額外的保留行為，引起峰變寬，拖尾，使柱效下降，保留時間變化，到一定程度時會導致柱壓升高，對許多樣品特別是復雜樣品很難判斷其是否含有強保留物質，因此要預防這一切的方式，堅持每天分析完成后用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個柱體積以上。

清洗方法：
1) 未使用緩沖鹽，每天分析完成后用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個柱體積以上；
2) 使用緩沖鹽，用上述方法去除緩沖鹽后，用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個柱體積以上；
3) 補救方法：水–乙腈–異丙醇（或氯仿）–乙腈–水，每一步需要沖洗不少于30個柱體積。
注意：不要輕易打開柱頭，一旦打開，很難恢復到新柱的水平。因為柱頭打開而造成的檢測后果，客戶自行負責。

色譜柱再生
色譜柱作為液相色譜中昂貴的色譜耗材，會隨著使用時間和進樣次數(shù)的增加，會出現(xiàn)異常的色譜現(xiàn)象，如果一根色譜柱的柱效太低或者柱壓太高，通常認為該色譜柱使用壽命已到，為了延長色譜柱的使用壽命，除了*按照每一款色譜柱的性能使用以外，適當?shù)纳V柱再生是很有效的途徑。
1.氰基（CN）色譜柱維護和再生
CN基柱屬于中等極性的固定相，作反相色譜時操作和維護和C18柱*相同，增加水相比例，可以促進樣品的洗脫。但是CN屬于短鏈的鍵合相，水相比例太高易使CN鍵水解，尤其在色譜柱pH耐受范圍以外，酸性和堿性條件下柱壽命會下降很快。如果在這個條件下使用，需要按以下程序用15個柱體積溶液沖洗，如下：95%水/5%乙腈–THF*–95%乙腈/5%水并保持95%乙腈/5%水繼續(xù)沖洗，以低流速0.2-0.5mL/min過夜沖洗。
在pH耐受范圍條件使用時，也比較傷柱子，要注意沖洗，可以參照上述方法，時間可適當減少。柱子使用一定時間后，柱效下降，需要老化再生，再生時用15個柱體積的下列溶液沖洗：95%水/5%乙腈–THF*–95%乙腈/5%水再走流動相即可。

CN柱用于正相時，當柱子使用一定時間后，柱效下降，可清洗一下恢復柱性能，再生時用10個柱體積的下列溶液沖洗：氯仿–異丙醇–二氯甲烷再走流動相即可。
CN柱的pH范圍在pH 2.0-8.0。
CN柱的保存，可用異丙醇或正己烷保存（保存溶劑中不能含水），兩端封好，流動相改變時要注意過渡和兩相之間的互溶。

2.反相柱再生
反相色譜柱是使用zui普遍的色譜柱之一，除按照以上內(nèi)容使用以外，必要的再生清洗可以有效的延長色譜柱的使用壽命，用下列每種溶劑20~30個柱體積沖洗：
100％甲醇–100％乙腈–75％乙腈/25％異丙醇–100％異丙醇 –100％二氯甲烷–100％正己烷–100％異丙醇–100％甲醇
3.正相色譜柱的再生
正相氨基柱的鍵合官能團氨丙基要比C18、C8柱的鍵合官能團易水解，所以其使用壽命稍短，特別是使用反相條件時，要嚴格控制pH值范圍，pH值越低流動相中水的比例越高越易發(fā)生水解。
注意：所有試劑都要嚴格脫水

用氨基柱檢測酸性物質可能會使略帶負電荷的氨基官能團質子化，一定程度上改變對某類的分析物保留性質或表現(xiàn)為柱效下降，再生建議是：

用5-10個的柱體積的含0.5-1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液沖洗（沖洗后用不含堿的流動相洗去多余的氨），分析酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1％。
填料被樣品中雜質累積污染，色譜柱表現(xiàn)行為柱壓增高柱效降低等，依次用：甲醇–異丙醇–氯仿–正己烷–氯仿–異丙醇–甲醇沖柱子（各以0.5ml/min的流速，20個柱體積），再換流動相。
NH2柱用于反相條件時，NH2鍵會水解，尤其是在該柱子pH范圍以外，在酸性和堿性條件下柱壽命會下降很快，如果在這個條件下使用需要清洗一下，需要用10個柱體積溶液沖洗，也是正相條件下使用色譜柱的再生，建議：95％水/5％乙腈–THF*–95％乙腈/5％水，并保持95％乙腈/5％水繼續(xù)沖洗，以低流速0.2-0.5mL/min過夜沖洗。

反相使用氨基色譜柱的再生（每種淋洗液不少于30個柱體積）：NaOH(pH 9.0)–色譜純水沖–平衡到流動相或者適合保存的溶液。
其它正相柱（硅膠柱，Diol柱）的再生（每種淋洗液不少于20個柱體積）：正己烷–異丙醇。
正相柱除水：含2.5% 二甲氧基丙烷(dimethoxypropane)和2.5%冰醋酸的正己烷沖洗30個柱體積。